■ 產(chǎn)品簡介
本試劑盒是利用拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的原理，將片段克隆到載體中；此外，添加有去A酶，使得本載體對帶A尾或平末端的PCR產(chǎn)物都可連接，并且連接效率無差異。即適用于克隆由莊盟K5(ZT211)、Pfu和KOD等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物，也可克隆由莊盟F5(ZT213)、Taq、Taqplus、Tth和klenTaq等DNA聚合酶擴(kuò)增的帶A尾的PCR產(chǎn)物。可以用引物M13F和M13R進(jìn)行菌落PCR鑒定陽性克隆。
■ 產(chǎn)品亮點(diǎn)
1.無需繁瑣藍(lán)白斑篩選，陽性克隆率＞95%
2.操作簡單,僅需加入5×ZTOPO Mix和樣品,5分鐘完成連接；
3.適用于平末端 PCR 產(chǎn)物和帶 A 尾的 PCR 產(chǎn)物；
4.可以連接長達(dá)10kb片段（對6kb以內(nèi)片段，有超過90%的陽性率）
5.克隆位點(diǎn)兩旁都有 EcoR I 和 EcoR V 酶切位點(diǎn)，適合單酶切鑒定
6. 氨芐青霉素抗性基因去除 BsaI 位點(diǎn)，便于后續(xù) Golden Gate 或CRISPR/Cas9實(shí)驗(yàn)
7. 本載體使用Topo異構(gòu)酶進(jìn)行連接，酶切片段需去磷酸化。
■ 儲存
－20℃至少保存8個月，4℃可短時間保存（不超過30天）。
■ One step ZTOPO-Blunt/TA 載體測序引物序列
M13F: TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R: CAGGAAACAGCTATGACC
注1：“M13通用引物”有多種不同的序列，且個別引物合成公司默認(rèn)的M13引物與此載體所用的M13序列有差異，合成使用前務(wù)必先核對序列。
注2：個別常用酶切位點(diǎn)說明PstI 9、HindIII 624、ScaⅠ 2475
注3：載體全序列請?jiān)斠姽竟倬W(wǎng)
■ One step ZTOPO-Blunt/TA載體圖譜
■ One step ZTOPO-Blunt/TA載體多克隆位點(diǎn)序列
